产品货号:
BTN71202
中文名称:
血液RNA柱式提取试剂盒
英文名称:
Blood RNA column Extraction Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本产品是专门从动物全血样品中快速提取总RNA的试剂盒。
保存:常温,有效期一年。
使用方法
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- 直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品,不需裂解红细胞等预处理步骤,整个提取过程只需要十分钟左右。
- 可以全在室温下进行。
- 产量和纯度高。OD260/280一般在2.0左右,产率一般为2~5μg/mL人血,可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。
- 每次微量提取的最大样品处理量可以达到1.5mL,高于大多数同类产品。
- 与常用的抗凝剂(包括肝素,EDTA,柠檬酸钠,草酸钠)兼容。
组分 | 规格 |
血液RNA纯化溶液A | 50mL |
血液RNA纯化溶液B | 15mL |
血液RNA纯化溶液C | 50mL |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50mL |
RNA洗脱液 | 10mL |
保存:常温,有效期一年。
使用方法
- 将0.2~1.5mL新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5mL塑料离心管中。
- 14000g室温离心3分钟,弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2mL,则需要减少血液的使用量,具体减少量需根据具体情况决定,因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。
- 将1mL血液RNA纯化溶液A加入到血液细胞沉淀中,用移液枪充分吹打沉淀使细胞裂解。
- 将0.3mL的血液RNA纯化溶液B加入到离心管中,剧烈震荡30秒。
- 和0.2mL自备氯仿加入到离心管中,剧烈震荡30秒。
- 14000g室温离心3分钟,将上清液(为无色或浅红色,约0.5~0.9mL)转移到另一干净离心管中。
注意:转移的液体不要超过0.7mL,否则下一步不能加入等体积的血液RNA纯化溶液C。为防止污染,最好留100μL左右的上清液不取。下层有机相一般呈深红色,中间层为白色,含有DNA,蛋白质和其他细胞破碎物,避免触及或吸取。 - 加入等体积的血液RNA纯化溶液C,充分颠倒混匀。
- 分两次将溶液转移到离心吸附柱中,每次转移后14000g室温离心半分钟,弃穿透液。
- 加0.7mL通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。
- 如果有必要,可以再加0.3mL通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。
注意:增加此步可以进一步提高RNA的纯度。 - 室温14000g离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响RNA的后续反应。
- 将离心吸附柱转移到一个自备的RNase-free的收集管中,加入50 uLRNA洗脱液,室温放置1~2分钟。
- 14000g室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
- 电泳检测RNA完整性:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子。
- 在NanoDrop上测浓度和纯度。
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